Em mais um tópico da coluna ‘Drops de Genômica’, o oncologista André Murad (foto) explica a técnica de PCR (ou Reação em Cadeia da Polimerase), tecnologia laboratorial que consiste na amplificação de uma região específica do DNA e do RNA. Confira.
Por André Marcio Murad*
Com essa metodologia, é possível produzir uma quantidade enorme de cópias de pequenas porções do DNA que se deseja estudar, pois trata-se de uma replicação in vitro acelerada de segmentos de DNA. Consiste em colocar no mesmo espaço todos os elementos necessários para a síntese de DNA: DNA molde, primers, DNA polimerase e desoxirribonucleotídeos livres. Todos eles estão localizados em um tubo de ensaio colocado dentro de um termociclador, que por sua vez é capaz de fornecer grandes variações de temperatura em pequenos períodos de tempo, alcançando assim três etapas fundamentais:
(a) Desnaturação do DNA molde: isso é obtido a uma temperatura de 90–95 °C. Isso permite a ruptura das ligações de hidrogênio que unem ambas as fitas de DNA, expondo as bases nitrogenadas.
(b) Ligação dos primers por complementaridade ao DNA molde: é obtido diminuindo a temperatura para 35–52 °C.
(c) Alongamento da fita de DNA: é obtido a 70–72 °C. A polimerase deve ser termorresistente; portanto, a DNA polimerase usada vem de uma bactéria cujo habitat natural é a água de alguns gêiseres: Thermus aquaticus. Essa polimerase é chamada de Taq (T de Thermus, aq de aquaticus) polimerase. A Taq polimerase colocará os nucleotídeos de acordo com o que ela lê no DNA molde.
A sequência de execução é ilustrada na figura abaixo. No primeiro ciclo, partindo de uma cópia do gene de interesse (representado na cor verde), haverá duas cópias. Após 40 ciclos, milhões de cópias terão sido produzidas.
*André Murad é diretor científico do Grupo Brasileiro de Oncologia de Precisão (GBOP), diretor clínico da Personal - Oncologia de Precisão e Personalizada, professor adjunto coordenador da Disciplina de Oncologia da Faculdade de Medicina da UFMG, e oncologista e oncogeneticista da CETTRO Oncologia (DF)
